Ung Muster

Wenn Sie auf das kürzere tägliche Diagrammintervall zoomen, beachten Sie den “Handle”-Teil des Musters, das sich gerade entwickelt: Handeln Sie das “Tasse und Griff”-Muster? Nach welchen anderen Kriterien suchen Sie? Schreiben Sie uns Ihre Kommentare unten. Der Griff benötigt in der Regel mindestens ein paar Wochen, um sich richtig zu entwickeln (manchmal mehr). Während der Bildung wird die Preisaktion in der Regel niedriger ausfallen. Im Falle von $UNG wäre sogar ein “Undercut” des 25. März niedrigen und 20-tägigen exponentiellen gleitenden Durchschnitt akzeptabel. Allerdings muss der Preis während eines Rückziehers über dem Niveau von 20 $ halten. Andernfalls könnte eine Aufschlüsselung unterhalb dieses wichtigen Unterstützungsniveaus signalisieren, dass das Muster noch ein paar Monate benötigt, um sich selbst zu erarbeiten. In diesem Artikel verwenden wir aktuelle annotierte Charts des United States Natural Gas Fund ($UNG), einer Rohstoff-ETF, die grob den Preis von Spot-Erdgas-Futures verfolgt, um Ihnen zu zeigen, wie Sie den Becher handeln und mit Diagrammmusterumgehen umgehen. Betrachten wir zunächst den wöchentlichen Chart-Zeitrahmen von $UNG unten: Um eine detaillierte Analyse von AID-induzierten Mutationen durchzuführen, haben wir uns vorgenommen, einen NGS-Ansatz zu entwickeln, der eine Mutationsanalyse bei sehr hoher Tiefenabdeckung ermöglicht. Wir PCR verstärkten das mOrangeSTOP-Transgen aus insgesamt NIH-3T3-Zellen, die mit mOrangeSTOP und AID-ER oder AIDE58Q-ER kodukiert und in Gegenwart von OHT für 11 d kultiviert wurden. PCR-Produkte wurden in einer Illumina-Plattform geerbten, barcodecodiert und sequenziert.

Nach einer qualitativ hochwertigen Filterung und Ausrichtung erreichten wir im Durchschnitt eine Tiefe von 8,7 x 104 Lesevorgängen pro Basisposition, d.h. 100–1000-fach höher als in einem typischen Experiment durch Sanger-Sequenzierung, das den Nachweis von Tausenden von Mutationen pro Experiment lieferte (Tabelle 1). Wir verglichen das Mutationsmuster der Sequenzen, die Sanger und NGS in einem einzelnen Experiment erhalten haben. Wie erwartet wurde die durch konventionelle Sequenzierung beobachtete mittlere Mutationshäufigkeit an Zytosinen erhöht, die in WRC/GYW- und WRCY/RGYW AID-Mutations-Hotspots enthalten sind (Abb. 2 A; analysierte Hotspot-Zytosine und Guanine werden im gesamten Papier unterstrichen). Die gleiche Mutationspräferenz wurde in den von NGS erhaltenen Sequenzen gefunden, mit einer etwa vierfachen und sechsfachen Erhöhung der mittleren Mutationshäufigkeit an WRC/GYW- und WRCY/RGYW-Hotspots (Abb. 2 B und Tabelle 2). Im Gegensatz dazu enthielten Sequenzen aus AIDE58Q-ER-Zellen weniger Gesamtmutationsfrequenzen, die an diesen Hotspots nicht angestiegen waren, und enthielten stattdessen gleichmäßig verteilte Mutationen, was auf Hintergrundmutationsniveaus hindeutet (Abb. 2 B und Tabelle 2). Diese Ergebnisse bestätigen die Verwendung von NGS zum Nachweis von AID-Mutationen.

AID initiiert SHM und CSR durch Deakontamination von Cytosinrückständen in der DNA von Immunglobulingenen (Petersen-Mahrt et al., 2002; Di Noia und Neuberger, 2007; Maul et al., 2011). Die so erzeugte U:G-Inzeiminkannierstin kann durch alternative Wege verarbeitet werden, um die Einführung einer Mutation (SHM) oder die Erzeugung eines DNA-Doppelstrangbruchs und einer Rekombinationsreaktion (CSR) hervorrufen. Wenn die U:G-Inübereinstimmung repliziert wird, führt sie zu Übergangsmutationen (C-T oder G-A, abhängig von der DNA-Stränge, in der die Deamination stattfand). Alternativ kann Uracil durch Uracil-N-Glycosylase (UNG), ein Enzym, das Teil des Base Excision Repair (BER) Weges ist, aus der DNA herausgeschnitten werden. DIE UNG-Hemmung in B-Zelllinien und der UNG-Mangel bei Mäusen und Menschen führen zu einem veränderten SHM-Muster, bei dem der Anteil der Übergangsmutationen dramatisch erhöht und Transversionsmutationen (C-A oder G und G-C oder T) verringert werden (Di Noia und Neuberger, 2002; Rada et al., 2002, 2004; Imai et al., 2003; Xue et al., 2006). Darüber hinaus beeinträchtigt der UNG-Mangel CSR (Rada et al., 2002; Imai et al., 2003). Diese Ergebnisse zeigten, dass DIE UNG im Zusammenhang mit der Antikörperdiversifizierung eher zur mutagenen Auflösung von U:G-Inkongruenzen als zu ihrer fehlerfreien Reparatur durch DEN BER beiträgt, aber die Grundlage für diese fehleranfällige Tätigkeit der UNG wird nicht verstanden.

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